鐵皮石斛蘭科石斛蘭屬多年生的草本植物，是中國傳統(tǒng)名貴藥材。在中國原產(chǎn)安徽、浙江、福建、臺灣、云南等地，主要附生在巖石或樹干上。由于其生長條件的特殊和分布的局限性，野生條件下自然生產(chǎn)率低，又經(jīng)長期的過度采挖，使得野生鐵皮石斛瀕于枯竭，國內(nèi)的市場供不應(yīng)求。在常規(guī)的條件下，人工繁殖比較困難，且難以滿足日益增長的市場需求，長期以來組織培養(yǎng)技術(shù)由于繁殖快、增值高等特點(diǎn)在植物生產(chǎn)過程中得到廣泛的應(yīng)用。近年來有關(guān)鐵皮石斛組培方面的研究日益增多，但個(gè)文獻(xiàn)研究在外植體選擇，培養(yǎng)基利用，培養(yǎng)條件及消毒方法各有不同，本文對其進(jìn)行概括總結(jié)，分析鐵皮石斛組織培養(yǎng)存在的問題，提出相應(yīng)的解決策略及研究發(fā)展方向。旨在方便鐵皮石斛研究者文獻(xiàn)查閱，為鐵皮石斛事業(yè)的發(fā)展提供理論支持。

　　1、外植體的選擇

　　組培中外植體的選擇尤為重要，外植體不同實(shí)驗(yàn)結(jié)果也會有所不同。鐵皮石斛組培中，已有用種子、根尖、莖段以及腋芽為外植體，獲得種苗的研究。在實(shí)驗(yàn)中采用無病害一年生的鐵皮石斛健康苗的莖段、莖尖和種子的較多，且效果比其他外植體要好。選擇種子作為外植體時(shí)，種齡對種子萌發(fā)時(shí)間有關(guān)：60-180天的種子，種齡越長，萌發(fā)所需要的時(shí)間久越短，萌發(fā)率就越高。種齡較短萌發(fā)率低，但是過長萌發(fā)時(shí)間和萌發(fā)率差異就不明顯。

　　2、消毒方式

　　為了保證幼苗可以有效地保持母株的優(yōu)良性狀，防止新生苗發(fā)生變異或是病變，鐵皮石斛組培中常運(yùn)用無菌苗。但是在初期實(shí)驗(yàn)或后期改良中，外植體的消毒方式對實(shí)驗(yàn)的成果起關(guān)鍵作用。鐵皮石斛外植體的消毒多采取常規(guī)的二次消毒法，即在流水下沖洗30-60min，接著在無菌室內(nèi)用70%或75%乙醇處理30s，再用0.1%hgcl2浸泡6-15min，100 g/l的naclo溶液中浸泡20min或直接在2%naclo溶液中處理10min，無菌水沖洗4-5遍。運(yùn)用最多的是流水沖洗1小時(shí)，75%乙醇處理30s，0.1%hgcl2浸泡10min，無菌水沖洗4-5遍。

　　3、培養(yǎng)基的篩選

　　3.1基本培養(yǎng)基

　　有研究報(bào)道，鐵皮石斛在ms、1/2ms、n6、1/2 n6、white、ls、vw、 kc、sh、pt、b5、rm和fonnesbech等基本培養(yǎng)基中均能生長。但最適培養(yǎng)基也因外植體的不同而異。鐵皮石斛種子在ms、1/2ms、n6、1/2 n6、white培養(yǎng)基中萌發(fā)率較高;莖段在ms和n6培養(yǎng)基下效果最好;原球莖的最適培養(yǎng)基為1/2ms。誘導(dǎo)培養(yǎng)和增值培養(yǎng)常用的是ms基礎(chǔ)培養(yǎng)基;生根培養(yǎng)和壯苗用的是1/2ms為基本培養(yǎng)基。

　　3.2激素選擇

　　不同的激素對外植體的增值效果、生根狀態(tài)都很大影響。：naa會促進(jìn)生根，濃度過高會抑制叢生芽的萌發(fā)，最適濃度為0.2-0.5mg/l。6-ba對芽的誘導(dǎo)有益對胚萌發(fā)后的生長有抑制作用。2，4-d對胚的萌發(fā)有抑制作用。2mg/l的kt對帶芽的莖段和葉的分化起促進(jìn)作用等。在培養(yǎng)基中添加aba預(yù)培養(yǎng)，能夠提高試管苗的開花率。在鐵皮石斛組培中常用6-ba和naa激素。

　　3.3添加劑

　　在培養(yǎng)基中加入碳源與一些天然添加物可以促進(jìn)原球莖的增值與分化。加入活性炭，可以吸收植物的新陳代謝廢棄物，還可防止植物組織的褐化和促進(jìn)胚胎的發(fā)生與生長。馬鈴薯汁、蘋果汁、椰子汁、番茄汁、香蕉汁等能促進(jìn)原球莖的增值與分化。還有研究表明，在培養(yǎng)基中加入agno3有抗原球莖衰老，增進(jìn)原球莖的正常成苗，濃度為1mg/l時(shí)效果最佳;濃度為2mg/l時(shí)，植物發(fā)生輕微的毒害、壞死現(xiàn)象。在實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用最多的是椰子汁和香蕉汁。

　　4、培養(yǎng)條件

　　有實(shí)驗(yàn)表明，溫度高于27℃，原球莖增值較慢，生長不適，少許出現(xiàn)死亡現(xiàn)象;溫度在23℃時(shí)，原球莖的增值速度就會降低。但是溫度越高，培養(yǎng)中分生苗的數(shù)量就越多。有關(guān)原球莖的研究中發(fā)現(xiàn)，ph值在培養(yǎng)過程中會降低，培養(yǎng)體褐變，反復(fù)的轉(zhuǎn)接到新鮮培養(yǎng)基中可以防止此現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)中大都培養(yǎng)條件采用：溫度22-25℃，光照強(qiáng)度1200-2000lx，光照時(shí)間為8-12h/d，ph值5.4-5.6。

　　5、鐵皮石斛組織培養(yǎng)現(xiàn)存問題

　　近年來，鐵皮石斛組織發(fā)展迅速，很多公司都實(shí)行了規(guī)?；a(chǎn)，這既對野生鐵皮石斛起了保護(hù)作用，也緩解了市場供不應(yīng)求的局面，促進(jìn)了醫(yī)藥界等的發(fā)展。但現(xiàn)在的研究中還存在些不足之處：一、組培苗培養(yǎng)周期長，成本高。從外植體培養(yǎng)到植物再生，需要多次轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基，這樣過程復(fù)雜，消耗的成本高。二、組培過程中，大多數(shù)只為保證植物本身的遺傳性和提高繁殖倍，在鐵皮石斛所含藥用成分的含量的保持和積累方面研究甚少。三、雖然鐵皮石斛外植體來源廣泛，但是幾乎都用種子和莖段的研究，雖然實(shí)驗(yàn)成果令人欣喜，但是種子和莖段資源畢竟有限。四、有關(guān)報(bào)道說：鐵皮石斛原球莖增值培養(yǎng)10代以后就會產(chǎn)生退化現(xiàn)象，導(dǎo)致原球莖胚性的消失，只可以增值但是不能分化且會發(fā)生玻璃化現(xiàn)象。一般原球莖繁殖代數(shù)控制在4代內(nèi)，莖段繁殖在6代以內(nèi)，否則會降低移栽的成活率。五、以種子為外植體時(shí)，繁殖的后代不穩(wěn)定，有可能會發(fā)生變異，無法保證后代的優(yōu)良性。

　　6、鐵皮石斛研究及發(fā)展方向

　　針對上面所訴不足，鐵皮石斛今后的研究方向?yàn)椋?/p>

　　一、對培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化篩選，從而縮短周期，降低成本，提高生產(chǎn)率;并能通過改變條件來達(dá)到保證種子培養(yǎng)后代的優(yōu)良性，改善原球莖和莖段培養(yǎng)代數(shù)過多性能退化等現(xiàn)象。

　　二、加大對鐵皮石斛藥用成分的保持與積累與培養(yǎng)條件的關(guān)系研究，提高組培苗的藥用有效成分的含量。

　　三、加強(qiáng)對鐵皮石斛其他外植體的研究，以便在研究中能夠充分利用資源，提高資源利用率。

　　四、有關(guān)鐵皮石斛雜交、誘變和轉(zhuǎn)基因方面的育種工作還沒有報(bào)道，但是在蘭科植物研究中卻常見。加強(qiáng)鐵皮石斛抗病性、抗逆性等優(yōu)良性能的育種工作，對鐵皮石斛進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練，使鐵皮石斛在其他地區(qū)能夠正常生長。

　　五、利用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)對石斛細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，收集其產(chǎn)生的次生代謝物，直接生產(chǎn)藥用活性成分，具有優(yōu)質(zhì)、高效、易于管理、勞動(dòng)強(qiáng)度低、不受自然條件影響和不占用耕地等優(yōu)點(diǎn)，從根本上解決了石斛生長緩慢，栽培條件要求較嚴(yán)的問題。