?? 作者:創(chuàng)始人?? 發(fā)布時(shí)間:2022-08-12 17:07:13?? 瀏覽次數(shù):6
1. 培養(yǎng)基架配制注意事項(xiàng)
植物組織培養(yǎng)最常用MS培養(yǎng)基,包含十幾種化合物。有些化合物相遇會(huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生沉淀,影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分,所以MS培養(yǎng)基需要配制多種高倍母液。
配制母液時(shí),尤其涉及大量元素的母液時(shí),一定要等一種成分溶解之后,再緩慢的添加另一種成分;切記一鍋煮,即不能將各種化合物一齊添加進(jìn)去。
2. 滅菌后培養(yǎng)基不凝膠或者凝膠偏軟
植物凝膠、瓊脂都對(duì)酸性條件敏感,pH 值低于5很難成膠或凝膠偏軟,切記高壓滅菌前調(diào)節(jié)培養(yǎng)基 pH 值(5.5 - 6.0)。植物凝膠對(duì)二價(jià)陽(yáng)離子濃度有要求,也就是相對(duì)于 MS 培養(yǎng)基,1 / 2 MS 培養(yǎng)基中植物凝膠要適當(dāng)增加用量。
另外滅菌后,倒出培養(yǎng)基前一定將培養(yǎng)基搖勻(帶防燙手套),因?yàn)榄傊芏却蟮讓雍扛?,容易造成培養(yǎng)基強(qiáng)度不均勻。
3. 水解酪蛋白有酸水解和酶水解之分,在使用過(guò)程中有無(wú)區(qū)別?
水解酪蛋白對(duì)胚狀體、不定芽的分化有良好的促進(jìn)作用,通常用量在 500 mg/L,不管是酸解還是酶解,作用都是一樣的,酶解更有利于發(fā)揮其作用。
4. 怎么溶解組培常用植物激素?
IAA、IBA、GA、玉米素、多效唑等應(yīng)先溶解于少量 95% 的乙醇中,再加水定容配制成母液。
如有結(jié)晶析出,可考慮用 1 / 10 體積的乙醇溶解后再定容;2,4 -D 易溶于堿性水溶液,可用少量 1mol/L 的 NaOH 溶液溶解后再慢慢加水定容;KT 和 6 -BA 先用少量的 HCL 溶解,再加水定容到一定的濃度。
5. 細(xì)胞分裂素使用濃度?
一般情況下在培養(yǎng)基中加入 0.1~10.0 mg/L 的細(xì)胞分裂素(6 -BA/KT/ZT),多數(shù)用 1.0~2.0 mg/L,KT 濃度為 0.5~2 mg/L,濃度要根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料來(lái)調(diào)整。細(xì)胞分裂素可以單獨(dú)使用也可以與細(xì)胞生長(zhǎng)素配合使用。
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