?? 作者:zhuobo?? 發(fā)布時(shí)間:2021-03-15 15:16:30?? 瀏覽次數(shù):1
組培設(shè)備的培養(yǎng)是指將培養(yǎng)材料放入培養(yǎng)室中使其生長(zhǎng),通過(guò)分裂和分化形成愈傷組織,在光照條件下進(jìn)一步分化為再生植物的過(guò)程。這句話可能有些小伙伴還是了解不了,沒(méi)關(guān)系,下面咱們就來(lái)具體了解一下。
一、組培設(shè)備培養(yǎng)方法
1.固體培養(yǎng)法
即用瓊脂固化培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)植物材料的方法。是現(xiàn)在常用的方法。雖然該方法設(shè)備簡(jiǎn)單,易行,但養(yǎng)分分布不均,生長(zhǎng)速度不均衡,并常有褐化中毒現(xiàn)象發(fā)生。
2.液體培養(yǎng)法
即用不加固化劑的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)植物材料的方法。由于液體中氧氣含量較少,所以通常需要通過(guò)攪動(dòng)或振動(dòng)培養(yǎng)液的方法以確保氧氣的供給,采用往復(fù)式搖床或旋轉(zhuǎn)式搖床進(jìn)行培養(yǎng),其速度一般為50~100r/min,這種定期浸沒(méi)的方法,既能使培養(yǎng)基均一,又能保證氧氣的供給。
二、組培設(shè)備培養(yǎng)步驟
1.初代培養(yǎng)
初代培養(yǎng)旨在獲得無(wú)菌材料和無(wú)性繁殖系。即接種某些外植體后,初的幾代培養(yǎng)。初代培養(yǎng)時(shí),常用誘導(dǎo)或分化培養(yǎng)基,即培養(yǎng)基中含有較多的細(xì)胞分裂素和少量的生長(zhǎng)素。初代培養(yǎng)建立的無(wú)性繁殖系包括:莖梢、芽叢、胚狀體和原球莖等。根據(jù)初代培養(yǎng)時(shí)發(fā)育的方向可分為:
1)頂芽和腋芽的發(fā)育
采用外源的細(xì)胞分裂素,可促進(jìn)使具有頂芽或沒(méi)有腋芽的休眠側(cè)芽啟動(dòng)生長(zhǎng),從而形成一個(gè)微型的多枝多芽的小灌木叢狀的結(jié)構(gòu)。在幾個(gè)月內(nèi)可以將這種叢生苗的一個(gè)枝條轉(zhuǎn)接繼代,重復(fù)芽苗增殖的培養(yǎng),并且迅速獲得多數(shù)的嫩莖。然后將一部分嫩莖轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上,就能得到可種植到土壤中去的完整小植株。一些木本植物和少數(shù)草本植物也可以通過(guò)這種方式來(lái)進(jìn)行再生繁殖,如月季、茶花、菊花、香石竹等等。這種繁殖方式也稱作微型繁殖,它不經(jīng)過(guò)發(fā)生愈傷組織而再生,所以是能使無(wú)性系后代保持原品種的一種繁殖方式。
適宜這種再生繁殖的植物,在采樣時(shí),只能采用頂芽、側(cè)芽或帶有芽的莖切段,其他如種子萌發(fā)后取枝條也可以。
莖尖培養(yǎng)可看作是這方面較為特殊的一種方式。它采用幼嫩的頂芽的莖尖分生組織作為外植體進(jìn)行接種。在實(shí)際操作中,采用包括莖尖分生組織在內(nèi)的一些組織來(lái)培養(yǎng),這樣便保證了操作方便以及容易成活。
用靠培養(yǎng)定芽得到的培養(yǎng)物一般是莖節(jié)較長(zhǎng),有直立向上的莖梢,擴(kuò)繁時(shí)主要用切割莖段法,如香石竹、矮牽牛、菊花等。但特殊情況下也會(huì)生出不定芽,形成芽叢。
2)不定芽的發(fā)育
在培養(yǎng)中由外植體產(chǎn)生不定芽,通常首先要經(jīng)脫分化過(guò)程,形成愈傷組織的細(xì)胞。然后,經(jīng)再分化,即由這些分生組織形成器官原基,它在構(gòu)成器官的縱軸上表現(xiàn)出單向的極性(這與胚狀體不同)。多數(shù)情況下它形成芽,后形成根。
另一種方式是從器官中直接產(chǎn)生不定芽,有些植物具有從各個(gè)器官上長(zhǎng)出不定芽的能力如矮牽牛、福祿考、懸鉤子等。當(dāng)在試管培養(yǎng)的條件下,培養(yǎng)基中提供了營(yíng)養(yǎng),特別是提供了連續(xù)不斷植物激素的供應(yīng),使植物形成不定芽的能力被大大地激發(fā)起來(lái)。許多種類的外植體表面幾乎全部為不定芽所覆蓋。在許多常規(guī)方法中不能無(wú)性繁殖的種類,在試管條件下卻能較容易地產(chǎn)生不定芽而再生,如柏科,松科,銀杏等一些植物。許多單子葉植物儲(chǔ)藏器官能強(qiáng)烈地發(fā)生不定芽,用百合鱗片的切塊就可大量形成不定鱗莖。
在不定芽培養(yǎng)時(shí),也常用誘導(dǎo)或分化培養(yǎng)基。用靠培養(yǎng)不定芽得到的培養(yǎng)物,一般采用芽叢進(jìn)行繁殖,如非洲菊、草莓等。
3)體細(xì)胞胚狀體的發(fā)生與發(fā)育
體細(xì)胞胚狀體類似于合子胚但又有所不同,它也通過(guò)球形,心形,魚雷形和子葉形的胚胎發(fā)育時(shí)期,終發(fā)育成小苗。但它是由體細(xì)胞發(fā)生的。胚狀體可以從愈傷組織表面產(chǎn)生,也可從外植體表面已分化的細(xì)胞中產(chǎn)生,或從懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞中產(chǎn)生。
4)初代組培外植體的褐變
外植體褐變是指在接種后,其表面開(kāi)始褐變,有時(shí)甚至?xí)拐麄€(gè)培養(yǎng)基褐變的現(xiàn)象。它的出現(xiàn)是由于植物組織中的多酚氧化酶被激活,而使細(xì)胞的代謝發(fā)生變化所致。在褐變過(guò)程中,會(huì)產(chǎn)生醌類物質(zhì),它們多呈棕褐色,當(dāng)擴(kuò)散到培養(yǎng)基后,就會(huì)控制其他酶的活性,從而影響所接觸外植體的培養(yǎng)
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